雞玉米赤霉烯酮(ZEN)試劑盒 競爭法ELISA

上海軒澤康生物ELISA試劑盒種類繁多，根據產品名稱原理大致分為間接法、夾心法、競爭法、捕獲包被法（也稱為反向間接法，比較少見）。其中各類型試劑盒的基本原理可電詢我司業務人員進行詳細了解。以下是關于各類型ELISA試劑盒及適用類型：

間接法：測定總抗體或IgG抗體

抗體夾心法：測定二價或二價以上大分子抗原

抗原夾心法：測定抗體

抗體競爭法：測定抗體

抗原競爭法：測定只有一個抗原決定簇的小分子半抗原

捕獲包被法：測定IgM,傳染病的早期診斷

檢測原理：試劑盒采用競爭法酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被玉米赤霉烯酮（ZEN）抗原的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的競爭抗原，經過溫育并洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的玉米赤霉烯酮（ZEN）呈負相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。

花生樣本處理方法：樣本去殼粉碎，稱取5g于100ml具塞三角瓶中，加入25ml 60%甲醇誰溶液和20ml正乙烷振蕩10min，濾紙過濾，棄去1/4初濾液，收集其余濾液于125ml分液漏斗中，靜置分層后放出下層60%甲醇水提溶液?，F提取液2ml，加入2ml超純水稀釋，使提取液甲醇濃度為30%，此為樣品代測液。

雞玉米赤霉烯酮(ZEN)試劑盒 競爭法ELISA組成及試劑配制：

1. 酶標板（Microelisa stripplate）：一塊（96孔或者48孔）

2. 標準品（Standard）：0.3ml*6管或者0.3ml*6管

3. 本稀釋液（Sample Diluent）：6ml或者3ml

4. 競爭抗原-HRP（HRP-Conjugate reagent）：10ml或者5ml

5. 20x洗滌緩沖液（20X Wash solution）：25ml或者15ml（按說明書進行稀釋）

6. 底物A（Chromogen Solution A）：6ml或者3ml

7. 底物B（Chromogen Solution B）：6ml或者3ml

8. 終止液（Stop Solution）：6ml或者3ml

9. 封板膜（Closure plate membrane）：2張

10. 說明書（User manual）：1份

11. 自封袋（Sealed bags）：1個

注：標準品（S0-S5）濃度依次為：0、2、4、8、16、32 ng/mL

雞玉米赤霉烯酮(ZEN)試劑盒 競爭法ELISA結果判斷

1.  15分鐘內在波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值；

2.  百分結合率計算：設S0管計數為B0，各標準管或樣品管計數為B，非特異管計數為NSB，則百分結合率計算公式如下：B/B0=(B－NSB)/(B0－NSB)×100%

3.  logit計算:各標準點或樣品管的logit值計算公式如下:logit=ln(B/B0)/(1－B/B0)

4.  將標準品的OD均值與標準品0點的OD均相除，為標準點的百分結合率，在log-logit坐標紙上繪圖。

5.  Log-logit雙對數標準曲線：坐標紙上橫軸從左至右第一個1-9表示為第一個10進位，第二個1-9表示為第二個10進位。第三個1-9表示為第三個10進位。坐標紙縱軸為百分比（1-99），即各標準吸光值的百分結合率。取一條通過各點的直線。要求盡可能多的點在線上，同時剩余的點均勻分布在直線的兩邊。樣品也同樣由吸光值計算百分結合率，再從縱軸上的相應結合率找到直線上的點，此點對應的橫坐標濃度即為樣品的濃度，無須換算。

6.  人工處理：以標準濃度取log值為橫坐標，對應的logit值為縱坐標在普通坐標紙上或以標準濃度為橫坐標，對應的B/B0為縱坐標在logit-log坐標紙上畫出標準曲線（理想化時是一條直線）。根據待測樣

品的B/B0可以從坐標紙上查出樣品的濃度值。如果使用普通坐標紙，查出的數值應取反對數才是最后的濃度值。

7.  自動處理：使用logit-log或四參數數據處理模式，由電腦自動計算得出結果。

8.  敏感度：0.25 ng/mL

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