人纖連蛋白(FN)科研ELISA試劑盒 定量檢測

【纖連蛋白(FN)簡介】：是細胞外基質的一種高分子量（約500-600 kDa）糖蛋白，與稱為整合素的跨膜受體蛋白結合。纖連蛋白還與其他細胞外基質蛋白結合，如膠原蛋白、纖維蛋白和硫酸肝素蛋白多糖。纖連蛋白以蛋白二聚體的形式存在，由兩條幾乎相同的多肽鏈組成，通過一對C端二硫鍵連接。每個纖連蛋白亞單位的氨基酸分子量為~230-~275 kDa，包含三種類型的模塊：I型、II型和III型。

檢測前準備工作：

1. 請提前20分鐘從冰箱中取出試劑盒，平衡至室溫。

2. 從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能有結晶，屬于正常現象；放置室溫，輕搖均勻，待結晶溶解后再配置洗滌液。可將20ml濃縮洗滌液用蒸餾水或去離子水稀釋配置成400ml工作濃度的洗滌液，未用完的放回4℃

3. 20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。

檢測原理：試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被纖連蛋白（FN）抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經過溫育并洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的纖連蛋白（FN）呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。

人纖連蛋白(FN)科研ELISA試劑盒 定量檢測組成：（檢測范圍請參考說明書）

注意：使用前請檢查試劑盒中試劑的標簽和數量與表格是否一致。 

實驗需要但未提供的材料及耗材：

1、酶標儀（建議儀器使用前提前預熱） 

2、精密移液器、吸頭、加樣槽 

3、蒸餾水或去離子水 

4、洗瓶或者自動洗板機 

5、37℃水浴鍋或恒溫箱 

6、EP 管 

7、無粉一次性乳膠手

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 人纖連蛋白(FN)科研ELISA試劑盒 定量檢測操作流程如下：

【平衡試劑盒至常溫】：取出實驗過程中所需板條，剩余半條用自封袋密封放回4攝氏度。

【加樣】：設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL。在樣本孔先加樣本10μl再加稀釋液40μl，（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）
【加酶】：標準品孔和樣本孔總每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗原100μL空白孔除外。
【溫育】：用封板膜封住反應孔，37℃恒溫箱溫育60分鐘。
【配液】：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用。
【洗滌】：小心揭掉封板膜，棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置60秒后甩去洗滌液，吸水紙上拍干。如此重復5次（也可用洗板機洗板）。

【顯色】：每孔先加入底物溶液A 50μl，再加入底物溶液B 50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光孵育15分鐘。
【終止】：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
【測定】：以空白孔調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

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